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Text File  |  1995-03-25  |  3KB  |  41 lines
  1.        Document 0816
  2.  DOCN  M9550816
  3.  TI    Three-colour flow cytometric immunophenotyping in HIV-patients;
  4.        comparison to dual-colour protocols.
  5.  DT    9505
  6.  AU    Lillevang ST; Sprogoe-Jakobsen U; Simonsen B; Kristensen T; Department
  7.        of Clinical Immunology, Odense University Hospital,; Denmark.
  8.  SO    Scand J Immunol. 1995 Feb;41(2):114-20. Unique Identifier : AIDSLINE
  9.        MED/95167408
  10.  AB    Flow cytometric measurement of circulating CD4+ lymphocytes is important
  11.        in the evaluation of disease progression in HIV-infected patients.
  12.        Development of dyes that can be exited at 488 nm and have emission
  13.        maximum in the far red area has made three-colour protocols, together
  14.        with fluorescein isothiocyanate (FITC) and R-phycoerythrin (PE),
  15.        possible in most clinical flow cytometers. We report here the comparison
  16.        of a two-tube, three-colour protocol (including CD45/CD4/ CD3 and
  17.        CD8/CD4/CD3) with our conventional dual-colour protocol. No significant
  18.        differences were found between percentage of CD3+ lymphocytic cells
  19.        determined with three different antibody combinations. When the
  20.        CD8/CD4/CD3 combination was used a systematic overestimation of CD3+
  21.        CD4+% cells was found. This turned out to be caused by the formation of
  22.        'CD8-escapees'. These are clumps of CD8+ cells that fall outside the
  23.        lymphocyte gating region, principally because of high side scatter. The
  24.        problem can be overcome by rigorous vortexing to loosen aggregates. The
  25.        lymphocyte gating principle used in this protocol (gating on a side
  26.        scatter/CD45 dot plot) is readily applicable to other antibody
  27.        combinations. This was demonstrated by measuring CD5+ B lymphocytes, a
  28.        subset receiving increasing attention in the study of HIV-induced immune
  29.        deviations. We conclude that our three-colour protocol for CD4+
  30.        T-lymphocyte determinations offers significant advantages to the
  31.        conventional dual-colour method, and we suggest that when possible
  32.        anti-CD45 be added to dual-colour combinations in order to improve
  33.        lymphocyte gating.
  34.  DE    Antigens, CD/*IMMUNOLOGY  B-Lymphocytes/IMMUNOLOGY  Comparative Study
  35.        Flow Cytometry/*METHODS  Human  HIV Infections/*IMMUNOLOGY
  36.        Immunophenotyping/*METHODS  T-Lymphocytes/IMMUNOLOGY  JOURNAL ARTICLE
  37.  
  38.        SOURCE: National Library of Medicine.  NOTICE: This material may be
  39.        protected by Copyright Law (Title 17, U.S.Code).
  40.  
  41.